Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZnT-7 (h): sc-405830

Présentation

SLC30A7 code le transporteur de zinc ZnT-7, un membre de la famille SLC30 (ZnT) qui assure l’efflux de zinc du cytosol vers des compartiments intracellulaires, contribuant à l’homéostasie du zinc et à la disponibilité compartimentée des ions métalliques. En régulant la distribution du zinc au sein de la voie sécrétoire et du système endomembranaire, ZnT-7 influence l’activité des métalloprotéines, l’équilibre rédox et les processus de signalisation dépendants du zinc qui façonnent le métabolisme cellulaire et les réponses au stress. Des altérations du transport du zinc ont été associées à des perturbations de la biologie des granules d’insuline, de la signalisation inflammatoire et du stress oxydant, ce qui fait de SLC30A7 une cible d’intérêt dans les études sur les dysfonctionnements métaboliques et les mécanismes complexes de maladies associées. En tant que régulateur de l’homéostasie du zinc, ZnT-7 est également pertinent pour l’étude du fonctionnement des organites et de la maturation d’enzymes dépendantes des métaux dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZnT-7 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC30A7 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC30A7, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC30A7 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZnT-7.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC30A7 pour l'étude de la signalisation de ZnT-7, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC30A7 essentiels à la fonction de ZnT-7
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC30A7 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZnT-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZnT-7 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC30A7. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZnT-7 plasmide HDR (h) et le ZnT-7 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC30A7 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC30A7 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.