Plasmide CRISPR d'Activation (m) ZNRF1: sc-431297-ACT

Le gène murin *Znrf1* code ZNRF1, une ligase E3 de type RING qui contribue à réguler le renouvellement des protéines via une signalisation dépendante de l’ubiquitine, façonnant l’homéostasie neuronale et les réponses cellulaires au stress. L’activité de ZNRF1 a été associée au maintien des axones et aux programmes de dégénérescence axonale, notamment en modulant la stabilité de substrats clés dans des voies liées aux lésions et au stress. En contrôlant l’ubiquitination, ZNRF1 peut influencer la protéostasie, la dynamique du cytosquelette et les voies de signalisation de survie, qui sont centrales en neurobiologie. Le dérèglement de ces processus est pertinent dans des modèles de neurodégénérescence et de lésion des nerfs périphériques, où une signalisation ubiquitine altérée et une intégrité axonale compromise contribuent à des phénotypes associés à la maladie.

ZNRF1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Znrf1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZNRF1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Znrf1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Znrf1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZNRF1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Znrf1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZNRF1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZNRF1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Znrf1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.