Plásmido CRISPR de Activación (h) ZNF750: sc-408278-ACT

ZNF750 codifica un factor de transcripción con dedos de zinc que actúa como regulador clave del compromiso de linaje epitelial y de la diferenciación terminal, con funciones destacadas en la maduración de los queratinocitos y en la homeostasis del epitelio estratificado. Modula programas transcripcionales vinculados a la formación de la barrera epidérmica, la salida del ciclo celular y la represión de estados tipo progenitor mediante el control coordinado de redes génicas asociadas a la diferenciación. La alteración de la expresión de ZNF750 se ha asociado con una diferenciación epitelial desregulada y cambios en el comportamiento proliferativo, lo que lo hace relevante para estudios de la biología del epitelio escamoso y de los mecanismos de enfermedad relacionados. Como proteína nuclear que se une al ADN, ZNF750 constituye un nodo abordable para diseccionar los circuitos transcripcionales que gobiernan la expresión génica específica de tejido.

ZNF750 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ZNF750 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ZNF750 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ZNF750 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ZNF750, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ZNF750. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ZNF750 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ZNF750 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ZNF750 en células tumorales con expresión de ZNF750 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.