ZNF224 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-407529-ACT

ZNF224 codifica um fator de transcrição do tipo dedo de zinco C2H2 contendo um domínio KRAB, que regula a expressão gênica por meio de ligação ao DNA específica de sequência e do recrutamento de complexos correpressores, como KAP1/TRIM28, moldando o estado da cromatina e o output transcricional. Ele participa de programas de repressão transcricional ligados ao controle epigenético, à regulação do ciclo celular, a respostas ao estresse e à diferenciação, com efeitos dependentes do contexto sobre os genes-alvo a jusante. A atividade alterada de ZNF224 tem sido associada a redes transcricionais desreguladas observadas em múltiplos contextos de doença, incluindo vias relacionadas ao câncer e à sinalização inflamatória. Como o ZNF224 pode modular circuitos amplos de regulação gênica, ele é frequentemente estudado como um nó que conecta a regulação da cromatina ao fenótipo.

ZNF224 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF224 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZNF224 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF224 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF224, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZNF224. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF224 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZNF224 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZNF224 em células tumorais com expressão de ZNF224 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.