Plasmide Double Nickase (h) XIAP: sc-416497-NIC

XIAP (inhibiteur de l’apoptose lié au chromosome X, BIRC4) est un membre cytosolique de la famille des IAP qui se lie directement aux caspases-3, -7 et -9 et les inhibe, modulant ainsi l’apoptose intrinsèque et extrinsèque. Grâce à son activité de ligase E3 de l’ubiquitine et à ses interactions avec RIPK2, TAK1 et les protéines TAB, XIAP influence des voies de signalisation dépendantes de l’ubiquitine, en lien avec l’activation de NF-κB et les réponses inflammatoires. XIAP participe également au dialogue entre la régulation de la mort cellulaire et l’immunité innée, en modulant les seuils d’entrée en apoptose en réponse au stress et aux signaux cytokiniques. Un dérèglement de la fonction de XIAP a été associé à des modifications de la sensibilité à l’apoptose et à des phénotypes de signalisation immunitaire altérés, soulignant son intérêt dans l’étude de la biologie des cancers et des physiopathologies liées à l’immunité.

XIAP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus XIAP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de XIAP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de XIAP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de XIAP.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.