Plasmide Double Nickase (h) WT1: sc-400095-NIC

WT1 code un facteur de transcription à doigts de zinc qui régule la spécification des lignages, le contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose, via une activation ou une répression transcriptionnelle dépendante du contexte. Il intervient dans des programmes développementaux, en particulier dans les tissus urogénitaux et hématopoïétiques, et s’articule avec des voies contrôlant la différenciation et la plasticité épithélio-mésenchymateuse, en modulant des réseaux de facteurs de croissance et de régulation transcriptionnelle. WT1 participe également au traitement de l’ARN, avec des effets spécifiques selon les isoformes sur l’épissage et la liaison aux acides nucléiques, contribuant à des sorties régulatrices complexes. Une expression dérégulée de WT1 ou des mutations de ce gène sont impliquées dans de multiples cancers et troubles du développement, ce qui en fait un marqueur largement utilisé ainsi qu’un nœud mécanistique dans l’étude des circuits transcriptionnels oncogéniques et de la régulation du destin cellulaire.

WT1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.