Plasmide CRISPR d'Activation (h) WT1: sc-400095-ACT

WT1 (Wilms tumor 1) code un facteur de transcription à doigts de zinc qui régule les décisions de destinée cellulaire au cours du développement embryonnaire et de l’homéostasie tissulaire, avec des rôles majeurs dans la néphrogenèse, le développement des gonades et la différenciation du mésothélium. WT1 module des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, l’apoptose, les transitions épithélio-mésenchymateuses et la spécification de lignée, en interagissant avec des voies telles que Wnt/β-caténine, la signalisation TGF-β et des réseaux sensibles aux facteurs de croissance. En biologie humaine, une expression altérée de WT1 ou des mutations ont été associées à des troubles du développement et à divers contextes cancéreux, où WT1 peut agir de manière dépendante du contexte comme régulateur transcriptionnel d’ensembles de gènes oncogéniques ou suppresseurs de tumeur. Ces caractéristiques font de WT1 un nœud utile pour étudier le remodelage des réseaux transcriptionnels, les trajectoires de différenciation et la régulation génique en réponse au stress.

WT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de WT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.