Plasmide Double Nickase (h) WRN: sc-401860-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) WRN correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide WRN Double Nickase (h) et le plasmide WRN Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant WRN. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: WRN Antibody (D-6): sc-376182
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) WRN | sc-401860-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) WRN | sc-401860-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
WRN code une hélicase/exonucléase de l’ADN de la famille RecQ qui coordonne la réplication et la recombinaison de l’ADN ainsi que de multiples processus de réparation, notamment la réparation par excision de base et la recombinaison homologue. WRN contribue à la stabilité des fourches de réplication et participe au maintien des télomères, soutenant ainsi l’intégrité du génome pendant la phase S et en réponse au stress réplicatif. La perte de fonction de WRN est associée au syndrome de Werner et est liée à une sénescence cellulaire prématurée, à l’instabilité chromosomique et à une signalisation altérée des dommages à l’ADN. WRN est également étudiée dans les contextes d’instabilité des microsatellites et pour ses interactions de voie avec la signalisation ATR/ATM, la réparation dépendante de PARP et le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire.
WRN Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WRN dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WRN. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WRN. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WRN.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.