Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-6 (m): sc-423720

Présentation

Wnt6 code pour Wnt-6, une glycoprotéine sécrétée qui agit comme un morphogène à courte portée dans la signalisation Wnt afin de réguler la spécification du destin cellulaire, la prolifération, la polarité et la mise en place des tissus au cours de l’embryogenèse et de l’homéostasie de l’adulte. Dans les systèmes murins, Wnt-6 peut engager des complexes récepteurs Frizzled/LRP pour moduler la transcription canonique dépendante de la β-caténine, ainsi que des voies non canoniques influençant le remodelage du cytosquelette et la migration directionnelle. Une activité altérée de Wnt6 perturbe les programmes du développement et la signalisation épithélio-mésenchymateuse, des processus fréquemment étudiés dans des modèles d’organogenèse, de régénération et de biologie du cancer. La dérégulation de la signalisation Wnt est largement impliquée dans les malformations congénitales et le remodelage des voies associé aux tumeurs, ce qui fait de Wnt6 un nœud pertinent pour l’analyse mécanistique des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-6 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Wnt6 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Wnt6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Wnt6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Wnt-6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Wnt6 pour l'étude de la signalisation de Wnt-6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Wnt6 essentiels à la fonction de Wnt-6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Wnt6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Wnt-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Wnt-6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Wnt6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Wnt-6 plasmide HDR (m) et le Wnt-6 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Wnt6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Wnt6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.