Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-15 (h): sc-406368

Présentation

WNT9B code pour la glycoprotéine sécrétée Wnt-15, un ligand qui active la signalisation Wnt afin de réguler, au cours du développement, la spécification du destin cellulaire, la prolifération, la polarité et l’organisation des tissus. Par ses interactions avec les récepteurs Frizzled et des co-récepteurs, Wnt-15 peut moduler des programmes transcriptionnels dépendants de la β-caténine, ainsi que des voies non canoniques contrôlant la dynamique du cytosquelette et la migration directionnelle. L’activité de WNT9B est impliquée dans des gradients morphogénétiques qui façonnent l’organogenèse, et une dérégulation de la signalisation Wnt est largement associée à des anomalies congénitales et à des processus oncogéniques. Dans des modèles cellulaires humains, WNT9B constitue un point d’entrée pertinent pour disséquer les interactions entre voies (cross-talk) avec la signalisation des facteurs de croissance et les réseaux transcriptionnels qui gouvernent la différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-15 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WNT9B dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WNT9B, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WNT9B à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Wnt-15.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WNT9B pour l'étude de la signalisation de Wnt-15, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WNT9B essentiels à la fonction de Wnt-15
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WNT9B pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Wnt-15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Wnt-15 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WNT9B. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Wnt-15 plasmide HDR (h) et le Wnt-15 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WNT9B pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WNT9B définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.