Wnt-11 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402655-ACT

O WNT11 humano codifica a glicoproteína secretada Wnt-11, um ligante de Wnt não canônico que sinaliza principalmente por meio das vias de polaridade planar celular e Wnt/Ca2+ para coordenar a polaridade celular, a migração direcional e a morfogênese dos tecidos. A Wnt-11 modula a dinâmica do citoesqueleto e programas de adesão por meio de efetores a jusante, como as GTPases da família Rho e a JNK, e pode, dependendo do contexto, cruzar-se com a transcrição dependente de β-catenina. Durante o desenvolvimento e em tecidos adultos, o WNT11 contribui para a organogênese e para a manutenção de estados epiteliais e mesenquimais. A desregulação da sinalização de WNT11 tem sido associada a fenótipos migratórios alterados e a programas de remodelamento observados em múltiplos contextos de doença, sustentando seu uso como um nó mecanístico em estudos de vias e fenótipos.

Wnt-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de WNT11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Wnt-11 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus WNT11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição WNT11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Wnt-11. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus WNT11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Wnt-11 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Wnt-11 em células tumorais com expressão de WNT11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.