Plasmide CRISPR d'Activation (h) WDR82: sc-406963-ACT

WDR82 (WD repeat domain 82) code une protéine contenant des répétitions WD40, qui agit comme un facteur régulateur associé à la chromatine, reliant la transcription au traitement de l’ARN. Elle a été impliquée dans le contrôle de l’expression génique à proximité du promoteur et dans la coordination des états de modification des histones via des interactions avec des complexes protéiques nucléaires qui façonnent l’issue transcriptionnelle. Par ces fonctions, WDR82 peut influencer des voies régissant la progression du cycle cellulaire, la stabilité du génome et des programmes transcriptionnels de réponse au stress. Une expression dérégulée ou une fonction altérée de WDR82 a été rapportée dans de multiples contextes liés au cancer et à la biologie du développement, ce qui soutient son intérêt en tant que cible pour des études mécanistiques de la régulation épigénétique et du contrôle transcriptionnel.

WDR82 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WDR82 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WDR82 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WDR82 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WDR82, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WDR82. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WDR82 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WDR82 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WDR82 dans les cellules tumorales présentant une expression de WDR82 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.