Plasmide CRISPR d'Activation (h) WDR73: sc-405788-ACT

WDR73 code une protéine contenant des répétitions WD, impliquée dans des processus cytoplasmiques et nucléaires qui soutiennent l’homéostasie des tissus prolifératifs, avec des rôles rapportés dans la progression du cycle cellulaire, l’organisation du cytosquelette et le maintien de la morphologie cellulaire. Les échafaudages à répétitions WD coordonnent couramment des assemblages multiprotéiques, ce qui suggère que WDR73 contribue à des réseaux de signalisation et de trafic régulés qui façonnent le développement des cellules neuronales et rénales. Une perturbation génétique de WDR73 a été associée à des anomalies du neurodéveloppement et à des phénotypes de néphropathie, en accord avec des fonctions dans la maturation du cerveau et du rein. Par conséquent, WDR73 présente un intérêt pour l’étude des relations génotype–phénotype dans des modèles de maladies neurodéveloppementales et rénales, ainsi que des voies qui gouvernent la différenciation et les réponses au stress cellulaire.

WDR73 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WDR73 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WDR73 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WDR73 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WDR73, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WDR73. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WDR73 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WDR73 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WDR73 dans les cellules tumorales présentant une expression de WDR73 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.