Pas de données CRISPR : l'image illustre la qualité de l'anticorps pour la visualisation des résultats de l'expérience CRISPR.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO WASP (m): sc-423693
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- WASP Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique WASP, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: WASP Antibody (F-8): sc-365859
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO WASP (m) | sc-423693 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Was** code la protéine du syndrome de Wiskott–Aldrich (WASP), un régulateur spécifique des cellules hématopoïétiques du remodelage du cytosquelette d’actine, qui relie la signalisation proximale aux récepteurs à la polymérisation ramifiée de l’actine dépendante d’Arp2/3. WASP intègre des signaux issus des GTPases de la famille Rho et de la signalisation des phosphoinositides afin de coordonner la migration, l’adhésion, la phagocytose et l’organisation de la synapse immunologique des cellules immunitaires. Par ces fonctions, WASP influence des processus tels que l’endocytose, le trafic vésiculaire et les réponses transcriptionnelles en aval des récepteurs immunitaires. Une activité de WASP dérégulée est associée à des phénotypes de dysfonctionnement immunitaire et constitue une porte d’entrée mécanistique pour étudier la signalisation dépendante du cytosquelette dans la biologie des leucocytes.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WASP (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Was dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Was, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Was à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WASP.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Was pour l'étude de la signalisation de WASP, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Was essentiels à la fonction de WASP
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Was pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le WASP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le WASP plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Was. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le WASP plasmide HDR (m) et le WASP (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Was pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Was définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.