Particules Lentivirales d'Activation (h) Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-400013-LAC

CDKN1A code p21 (Waf1/Cip1), un inhibiteur des kinases dépendantes des cyclines (CDK) qui impose des points de contrôle du cycle cellulaire en inhibant des complexes contenant CDK2 et CDK1, et en coordonnant les transitions G1/S et G2/M. p21 est un effecteur majeur en aval de la signalisation de p53 et intègre les réponses aux dommages de l’ADN, le stress de réplication et les programmes de sénescence via la modulation de la synthèse d’ADN dépendante de PCNA et du contrôle des checkpoints. En ajustant l’équilibre entre arrêt prolifératif et reprise, CDKN1A influence des voies liées à la stabilité génomique, à la différenciation cellulaire et à l’adaptation au stress à la frontière de l’apoptose. Une expression dérégulée de p21 ou des fonctions dépendantes du contexte sont impliquées dans de nombreux aspects de la biologie des cancers, des modèles de résistance aux thérapies, la sénescence associée à la fibrose et des phénotypes de microenvironnement inflammatoire étudiés dans des cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Waf1/Cip1/CDKN1A p21 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de CDKN1A dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Waf1/Cip1/CDKN1A p21 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription CDKN1A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Waf1/Cip1/CDKN1A p21. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif CDKN1A ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.