Plásmido Doble Nickase (m) Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-419607-NIC

Cdkn1a codifica el inhibidor de quinasas dependientes de ciclinas p21 (Waf1/Cip1), un efector clave de las respuestas al daño del ADN y al estrés que restringe la actividad de las CDK para hacer cumplir los puntos de control del ciclo celular en G1/S y G2/M. p21 está regulado transcripcionalmente por p53 e integra señales de vías dependientes de ATM/ATR, coordinando la detención del ciclo celular, la reparación del ADN y programas de senescencia dependientes del contexto. Mediante la modulación de los complejos ciclina–CDK y su interacción con PCNA, p21 influye en la dinámica de replicación y la estabilidad del genoma. La señalización desregulada de Cdkn1a/p21 está implicada en la tumorigenesis, el envejecimiento tisular y la remodelación asociada a la inflamación, lo que la convierte en un nodo común en estudios del control de la proliferación y la adaptación al estrés en modelos murinos.

Waf1/Cip1/CDKN1A p21 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Cdkn1a en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Cdkn1a. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Cdkn1a. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Cdkn1a alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.