Waf1/Cip1/CDKN1A p21CRISPR激活质粒(m): sc-419607-ACT
- 针对种属：mouse
- 20 µg 纯化的即用型的质粒DNA，最多可供20次转染
- Waf1/Cip1/CDKN1A p21 CRISPER激活质粒（m）是一种协同激活介质（SAM）转录激活系统，目的在于特定上调基因表达
- Waf1/Cip1/CDKN1A p21 CRISPR 激活质粒 (m)包含三种质量比为1:1:1的质粒：一种质粒编码与转录激活结构域VP64融合的去活化的Cas9 (dCas9)核酸酶(D10A and N863A)，和杀稻瘟素抗性基因；一种质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白，和潮霉素抗性基因；一种质粒编码与两个MS2 RNA适体融合的目标特异的20 nt向导RNA，和嘌呤霉素抗性基因。
- 形成的SAM复合物结合到转录起始位点上游大约200-250 nt的特定位点区域，为高效激活基因提供转录因子的招募
- 由 Waf1/Cip1/CDKN1A p21 CRISPR 激活质粒 (m) 和 Waf1/Cip1/CDKN1A p21 CRISPR 激活质粒 (m2) 编码的 gRNA 分别针对 Cdkn1a 转录起始位点上游的不同调控区域。其中一种或两种设计可能可用
- 转染后，基因敲除效率可以用抗体：Waf1/Cip1/CDKN1A p21: sc-6246，通过WB, IF或者IHC分析
订购信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 | 价格 | 数量 | 收藏夹 | |
Waf1/Cip1/CDKN1A p21CRISPR激活质粒(m) | sc-419607-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
Waf1/Cip1/CDKN1A p21CRISPR激活质粒(m2) | sc-419607-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
Cdkn1a 编码细胞周期依赖性激酶抑制因子 p21（Waf1/Cip1/CDKN1A）。p21 是 p53 依赖性细胞周期调控的关键效应分子，能够抑制 CDK2/CDK4 活性，从而在 G1/S 检查点实施阻滞。通过调节 cyclin–CDK 复合物以及与增殖细胞核抗原（PCNA）相关的 DNA 复制与修复过程，p21 将 DNA 损伤信号与细胞衰老、分化及应激反应整合起来。在肿瘤发生与组织损伤模型中，Cdkn1a 调控异常常与增殖失衡、基因组维护受损，以及在不同情境下凋亡与衰老程序的改变相关。作为 p53、MAPK 和 TGF-β 应答网络中的一个关键节点，p21 被广泛用于小鼠体系中评估检查点完整性、复制应激及细胞衰老相关表型。
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 CRISPR激活质粒（m）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性Cdkn1a的表达。
Waf1/Cip1/CDKN1A p21 CRISPR激活质粒（m）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的Cdkn1a基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于Cdkn1a转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性Waf1/Cip1/CDKN1A p21表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的Cdkn1a位点，并能够研究内源性位点上依赖于Waf1/Cip1/CDKN1A p21的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在Cdkn1a表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Waf1/Cip1/CDKN1A p21通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。