Plasmide Double Nickase (h) VPS13A: sc-407168-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) VPS13A correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide VPS13A Double Nickase (h) et le plasmide VPS13A Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant VPS13A. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) VPS13A | sc-407168-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) VPS13A | sc-407168-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
VPS13A code une grande protéine périphérique membranaire qui se localise aux sites de contact entre organites et contribue au transport des lipides ainsi qu’à l’homéostasie membranaire, avec des rôles établis dans le trafic endosomal, l’autophagie et la fonction mitochondriale. Dans les neurones et d’autres cellules à forte activité métabolique, VPS13A participe au maintien de la morphologie des organites et de leur répartition intracellulaire en coordonnant les échanges lipidiques et les événements de remodelage membranaire. La perturbation de VPS13A altère les réponses au stress cellulaire et la dynamique vésiculaire, ce qui en fait un nœud clé pour l’étude de la biologie des sites de contact membranaire et des voies de contrôle qualité des organites. Les variants perte de fonction sont associés à des phénotypes neurodégénératifs, fournissant un cadre pertinent pour la maladie pour des études mécanistiques dans des modèles de cellules humaines.
VPS13A Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus VPS13A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de VPS13A. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de VPS13A. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de VPS13A.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.