Plasmide Double Nickase (h) Vigilin: sc-404125-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Vigilin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Vigilin Double Nickase (h) et le plasmide Vigilin Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HDLBP. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Vigilin Antibody (H-3): sc-271523
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Vigilin | sc-404125-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Vigilin | sc-404125-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **HDLBP** code **Vigilin**, une protéine multifonctionnelle liant l’ARN, contenant de multiples domaines KH, qui s’associe à des complexes mRNP afin de réguler la stabilité des ARNm, leur localisation subcellulaire et leur traduction. Vigilin participe à des programmes de contrôle post-transcriptionnel liés à l’homéostasie des lipides et des lipoprotéines, notamment via la régulation de transcrits impliqués dans la gestion du cholestérol et les réponses au stress métabolique. En couplant le métabolisme de l’ARN aux voies de croissance et d’adaptation cellulaires, les altérations de l’activité de HDLBP/Vigilin ont été étudiées dans des contextes tels qu’un métabolisme dérégulé et des modèles de maladies prolifératives où les réseaux de régulation de l’ARN sont perturbés. Ces propriétés font de Vigilin une cible utile pour disséquer les mécanismes centrés sur l’ARN qui façonnent les sorties d’expression génique dans les cellules humaines.
Vigilin Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HDLBP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HDLBP. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HDLBP. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HDLBP.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.