Plasmide CRISPR/Cas9 KO vanin-1 (m): sc-423682

Présentation

Vnn1 code la vanine‑1, une pantéthéinase ancrée par glycosylphosphatidylinositol (GPI) qui hydrolyse la pantéthéine pour produire de l’acide pantothénique (vitamine B5) et de la cystéamine, reliant le métabolisme extracellulaire à l’équilibre rédox. L’activité de la vanine‑1 influence l’homéostasie de la coenzyme A, les réponses au stress oxydant et la signalisation inflammatoire, avec des rôles marqués au niveau des barrières épithéliales et dans le dialogue entre cellules immunitaires et tissus. Dans des modèles murins, Vnn1 a été associé à la régulation du recrutement leucocytaire, des réponses aux lésions tissulaires et de l’inflammation métabolique, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la colite, du stress hépatique et de phénotypes cardiométaboliques. Son expression répond souvent à des facteurs de stress environnementaux et peut moduler des voies qui gouvernent la dynamique du glutathion et la production de cytokines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO vanin-1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Vnn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Vnn1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Vnn1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine vanin-1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Vnn1 pour l'étude de la signalisation de vanin-1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Vnn1 essentiels à la fonction de vanin-1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Vnn1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le vanin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le vanin-1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Vnn1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le vanin-1 plasmide HDR (m) et le vanin-1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Vnn1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Vnn1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.