VAMP-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402306

Übersicht

VAMP3 kodiert das vesikelassoziierte Membranprotein 3 (VAMP-3), ein v-SNARE, das Membranfusionsereignisse vermittelt, die für die konstitutive und regulierte Exozytose erforderlich sind. Es ist am vesikulären Transport zwischen Recycling-Endosomen und der Plasmamembran beteiligt und unterstützt dabei das Rezeptor-Recycling, die Zytokinsekretion sowie die Bereitstellung von Membranproteinen während Zellmigration und -polarisierung. Die Funktion von VAMP-3 überschneidet sich mit Signalwegen der endosomalen Sortierung und der Assemblierung von SNARE-Komplexen, die die Aktivierung von Immunzellen und Wirt–Pathogen-Interaktionen prägen. Eine fehlregulierte Vesikeltransportdynamik unter Beteiligung von VAMP3 wurde u. a. im Kontext von Entzündung, veränderter Glukosetransporter-Dynamik und krebsassoziierten Veränderungen des Membranumsatzes und der Invasion untersucht.

Das VAMP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des VAMP3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des VAMP3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von VAMP3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die VAMP-3-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von VAMP3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der VAMP-3-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf VAMP3-Exone abzielen, die für die VAMP-3-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere VAMP3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom VAMP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom VAMP-3 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des VAMP3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das VAMP-3 HDR-Plasmid (h) und VAMP-3 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von VAMP3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten VAMP3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.