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Uteroglobin/SCGB1A1/CC10CRISPR激活质粒(h) | sc-400381-ACT | 20 µg | $397.00 |
SCGB1A1 编码子宫球蛋白(uteroglobin,也称 CC10),属于分泌型 secretoglobin 家族成员,主要由气道杯状细胞(club cells)及其他黏膜上皮产生。这种小分子同源二聚体蛋白通过调节炎症信号、限制氧化应激,并影响气道表面液中的磷脂与类二十烷酸(eicosanoid)代谢,从而维持上皮稳态。SCGB1A1 的表达与上皮分化程序密切相关,常被用作杯状细胞身份及气道重塑的标志物。SCGB1A1 水平的改变与慢性炎症性气道疾病以及上皮损伤应答有关,因此在研究黏膜屏障功能与炎症调控时具有重要意义。
Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 CRISPR激活质粒(h)提供了一种靶向、非破坏性的方法,可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性SCGB1A1的表达。
Uteroglobin/SCGB1A1/CC10 CRISPR激活质粒(h)是一个由三条质粒组成的协同激活介导(SAM)系统,旨在对人类细胞系中的SCGB1A1基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变(D10A 和 N863A)的无催化活性的 Cas9(dCas9)为核心,这些突变消除了核酸酶活性,同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合,并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用,并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA,其与两个MS2 RNA适配体融合,这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点,并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送,以确保系统所有组分的平衡表达。
在靶位点组装完成后,SAM复合物结合于SCGB1A1转录起始位点上游约200 bp处,VP64、p65和HSF1在此协同作用,招募转录 machinery并驱动内源性Uteroglobin/SCGB1A1/CC10表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同, dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列,从而保留了原生的SCGB1A1位点,并能够研究内源性位点上依赖于Uteroglobin/SCGB1A1/CC10的转录反应,使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在SCGB1A1表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟Uteroglobin/SCGB1A1/CC10通路恢复的宝贵工具。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。