Plasmide CRISPR d'Activation (h) USP9Y: sc-402723-ACT

USP9Y (ubiquitin specific peptidase 9, liée au chromosome Y) code une enzyme de déubiquitination qui retire l’ubiquitine des protéines substrats, influençant leur stabilité, leur trafic intracellulaire et la protéostasie. En tant que régulateur du renouvellement dépendant de l’ubiquitine, USP9Y est susceptible d’affecter des processus de signalisation et de réponse au stress qui reposent sur un équilibre entre ubiquitination et déubiquitination. Le gène est situé dans la région spécifique mâle du chromosome Y et est fréquemment étudié dans le contexte de la spermatogenèse et de la biologie testiculaire. Des altérations du statut d’USP9Y ont été associées à des phénotypes d’infertilité masculine, ce qui appuie son utilisation dans des études mécanistiques des contributions liées au chromosome Y à la fonction reproductive.

USP9Y Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de USP9Y sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

USP9Y Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus USP9Y dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription USP9Y, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de USP9Y. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus USP9Y natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de USP9Y au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie USP9Y dans les cellules tumorales présentant une expression de USP9Y silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.