USP54 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-405800-ACT

O gene humano **USP54** codifica uma desubiquitinase da família das proteases específicas de ubiquitina, que se prevê regular a rotatividade de proteínas e a amplitude da sinalização ao reverter a conjugação de ubiquitina. Por meio da desubiquitinação, a USP54 pode influenciar a proteostase, o tráfego endossomal e a dinâmica de vias de transcrição e de resposta ao estresse que dependem de remodelação mediada por ubiquitina. A desregulação da sinalização por ubiquitina está amplamente implicada na transformação oncogênica, na neurobiologia e na modulação imune, tornando a USP54 um alvo relevante para dissecar o comportamento de redes controladas por ubiquitina. Estudar a expressão e a função da USP54 pode esclarecer como a atividade de desubiquitinase molda a comunicação entre vias e fenótipos celulares em sistemas modelo relevantes para doenças.

USP54 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de USP54 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

USP54 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus USP54 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição USP54, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de USP54. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus USP54 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de USP54 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via USP54 em células tumorais com expressão de USP54 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.