Plasmide CRISPR/Cas9 KO USP39 (h): sc-406847

Présentation

USP39 (également appelé homologue de SAD1) code un facteur associé au spliceosome, indispensable à l’épissage du pré-ARNm malgré l’absence d’activité catalytique de déubiquitinase. Il contribue à l’assemblage et au fonctionnement du tri-snRNP U4/U6·U5 et favorise une excision correcte des introns, reliant ainsi USP39 à la régulation globale du transcriptome et à la progression du cycle cellulaire. La perturbation d’USP39 dérègle des programmes de maturation de l’ARN qui influencent la prolifération, le maintien du génome et les réponses au stress, des processus fréquemment altérés dans le cancer et d’autres troubles prolifératifs. Par conséquent, USP39 est largement étudié pour son rôle dans le contrôle, dépendant de l’épissage, de l’expression génique et des voies qui gouvernent la fidélité de la mitose.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO USP39 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène USP39 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du USP39, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert USP39 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine USP39.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en USP39 pour l'étude de la signalisation de USP39, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de USP39 essentiels à la fonction de USP39
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de USP39 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le USP39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le USP39 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus USP39. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le USP39 plasmide HDR (h) et le USP39 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie USP39 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles USP39 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.