Plasmide Double Nickase (h) USP14: sc-403167-NIC

USP14 code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui s’associe au protéasome 26S et modifie les chaînes d’ubiquitine portées par les substrats, régulant ainsi la dégradation protéasomale et l’homéostasie de l’ubiquitine dans les cellules humaines. En retirant l’ubiquitine des protéines conjuguées, USP14 influence le contrôle qualité des protéines, les réponses au stress cellulaire et des voies de signalisation liées à la protéostase, notamment des processus ayant un impact sur la progression du cycle cellulaire et l’apoptose. Des altérations de l’activité de USP14 ont été étudiées dans le contexte d’un dysfonctionnement du protéasome et d’une signalisation ubiquitine anormale, des mécanismes fréquemment impliqués en cancérologie et dans les maladies neurodégénératives. En tant que désubiquitinase associée au protéasome, USP14 est également pertinente pour étudier comment la dynamique de l’ubiquitine façonne le traitement des antigènes et, plus largement, le renouvellement des protéines lié à l’immunité.

USP14 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus USP14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de USP14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de USP14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de USP14.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.