Plasmide Double Nickase (h) USP11: sc-403368-NIC

L’USP11 humaine code une protéase spécifique de l’ubiquitine qui retire les chaînes d’ubiquitine des substrats protéiques afin de moduler leur stabilité, leur localisation et leur signalisation. USP11 participe au contrôle, dépendant de l’ubiquitine, des réponses aux dommages de l’ADN, des processus associés à la réplication et de la régulation transcriptionnelle, reliant la désubiquitination au maintien de l’intégrité du génome et à la progression du cycle cellulaire. Par ses actions au sein des voies ubiquitine–protéasome et de signalisation par l’ubiquitine, USP11 peut influencer le renouvellement des protéines et les réseaux de signalisation des points de contrôle impliqués dans l’adaptation au stress cellulaire. Le dérèglement de ces processus est fréquemment étudié dans le contexte de la transformation oncogénique, d’une capacité de réparation de l’ADN altérée et, plus largement, de défauts de protéostasie.

USP11 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus USP11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de USP11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de USP11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de USP11.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.