Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide CRISPR/Cas9 KO UROD (m): sc-423626
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- UROD Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique UROD, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UROD Antibody (C-4): sc-365297
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO UROD (m) | sc-423626 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Urod** code l’uroporphyrinogène décarboxylase (UROD), une enzyme cytosolique de la voie de biosynthèse de l’hème qui catalyse la décarboxylation de l’uroporphyrinogène III en coproporphyrinogène III. Cette étape soutient le flux cellulaire de tétrapyrroles et la production adéquate d’hème, indispensable à la respiration mitochondriale, au fonctionnement des cytochromes et au maintien de l’homéostasie redox. Une altération de l’activité d’UROD perturbe le métabolisme des porphyrines, favorisant l’accumulation d’intermédiaires porphyriniques et les réponses associées au stress oxydatif. Les défauts dépendants d’UROD sont pertinents pour les porphyries et offrent un point d’entrée mécanistique pour étudier le stress métabolique, la régulation du fer/de l’hème et la biologie des hépatocytes ou des lignées érythroïdes.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UROD (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Urod dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Urod, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Urod à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UROD.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Urod pour l'étude de la signalisation de UROD, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Urod essentiels à la fonction de UROD
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Urod pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le UROD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UROD plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Urod. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le UROD plasmide HDR (m) et le UROD (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Urod pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Urod définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.