Plasmide CRISPR/Cas9 KO urocortin III (h): sc-406580

Présentation

UCN3 code l’urocortine III, un neuropeptide sécrété de la famille des facteurs de libération de la corticotropine (CRF) qui transmet préférentiellement ses signaux via CRHR2 afin de moduler des programmes transcriptionnels dépendants de l’axe AMPc/PKA. Dans les tissus nerveux et périphériques, l’urocortine III contribue à la régulation de la physiologie adaptative au stress, de l’équilibre énergétique et des sorties autonomes, reliant les signaux neuroendocriniens à l’homéostasie métabolique et cardiovasculaire. L’activité de la voie CRHR2 influencée par UCN3 a été étudiée dans des contextes de phénotypes liés au stress, de gestion du glucose et de fonction vasculaire, faisant d’UCN3 un nœud utile pour disséquer la signalisation des hormones peptidiques et la biologie, sélective des récepteurs, de la famille CRF. Des altérations de la dynamique de signalisation UCN3/CRHR2 ont été associées à une dysrégulation neuroendocrinienne et métabolique dans des modèles expérimentaux, ce qui étaye sa pertinence pour la recherche mécanistique sur les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO urocortin III (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène UCN3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du UCN3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert UCN3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine urocortin III.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en UCN3 pour l'étude de la signalisation de urocortin III, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de UCN3 essentiels à la fonction de urocortin III
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de UCN3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le urocortin III plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le urocortin III plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus UCN3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le urocortin III plasmide HDR (h) et le urocortin III (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie UCN3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles UCN3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.