Plasmide CRISPR/Cas9 KO UPII (m): sc-423621

Présentation

Upk2 code l’uroplakine II (UPII), un marqueur de différenciation des cellules « parapluie » de l’urothélium associé aux tétraspanines, qui contribue à l’assemblage de la plaque urothéliale apicale et au maintien de la barrière urine–sang. UPII participe au trafic membranaire et à la formation de complexes d’uroplakines qui organisent des microdomaines lipidiques spécialisés, soutenant la polarité épithéliale et la fonction de barrière. Des modifications de la composition en uroplakines ou des programmes de différenciation dans l’urothélium ont été associées à une altération de l’intégrité de la barrière, à l’inflammation et à une susceptibilité accrue aux lésions des voies urinaires. Dans des modèles murins, l’expression de Upk2 est couramment utilisée pour étudier l’identité de la lignée urothéliale et le remodelage épithélial dans la physiopathologie de la vessie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO UPII (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Upk2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Upk2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Upk2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine UPII.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Upk2 pour l'étude de la signalisation de UPII, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Upk2 essentiels à la fonction de UPII
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Upk2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le UPII plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le UPII plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Upk2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le UPII plasmide HDR (m) et le UPII (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Upk2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Upk2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.