Plasmide CRISPR d'Activation (h) uPA/urokinase/PLAU: sc-400694-ACT

PLAU code pour l’activateur du plasminogène de type urokinase (uPA), une protéase à sérine sécrétée qui convertit le plasminogène en plasmine, favorisant ainsi la protéolyse péricellulaire et le remodelage de la matrice extracellulaire. Par ses interactions avec le récepteur de l’uPA (PLAUR/uPAR), l’uPA concentre l’activité protéolytique à la surface cellulaire et mobilise des réseaux de signalisation qui influencent l’adhérence et la migration, notamment des voies liées aux intégrines et aux facteurs de croissance. L’activité de PLAU intervient dans la fibrinolyse, la réparation des plaies et le remodelage tissulaire, et sa dérégulation est fréquemment étudiée dans des contextes de comportement cellulaire invasif et de microenvironnements inflammatoires. Ainsi, PLAU est largement utilisé comme nœud fonctionnel pour étudier la dynamique de la matrice pilotée par les protéases, la motilité cellulaire et les programmes d’expression génique associés au remodelage.

uPA/urokinase/PLAU Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PLAU sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

uPA/urokinase/PLAU Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PLAU dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PLAU, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de uPA/urokinase/PLAU. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PLAU natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de uPA/urokinase/PLAU au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie uPA/urokinase/PLAU dans les cellules tumorales présentant une expression de PLAU silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.