Particules Lentivirales d'Activation (h) UGT1A9: sc-417693-LAC

L’UGT1A9 humaine code l’UDP‑glucuronosyltransférase 1A9, une enzyme de métabolisme de phase II associée au réticulum endoplasmique, qui conjugue l’acide glucuronique à divers xénobiotiques et substrats endogènes afin d’en augmenter la solubilité et d’en favoriser l’élimination. Elle agit au sein de réseaux de glucuronidation hépatiques et extra‑hépatiques qui modulent l’exposition cellulaire aux petites molécules et influencent en aval le stress oxydatif et la signalisation inflammatoire. Les variations d’expression ou d’activité d’UGT1A9 sont associées à des différences interindividuelles de devenir des médicaments et de susceptibilité aux effets indésirables, et ont été étudiées dans des contextes tels que la fonction hépatique, la prise en charge rénale des métabolites et la pharmacologie du cancer. En tant que déterminant majeur du métabolisme par conjugaison, UGT1A9 est largement utilisée pour étudier la capacité de détoxification, les interactions entre voies avec les transporteurs et la régulation par les récepteurs nucléaires.

Les particules d'activation lentivirales UGT1A9 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de UGT1A9 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales UGT1A9 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription UGT1A9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de UGT1A9. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif UGT1A9 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.