Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGT1A9: sc-417693-ACT

UGT1A9 code une UDP‑glucuronosyltransférase humaine qui catalyse la glucuronidation de divers xénobiotiques et de petites molécules endogènes, augmentant leur solubilité aqueuse et facilitant leur élimination. En tant qu’enzyme de métabolisme de phase II, UGT1A9 contribue aux réseaux de détoxification hépatiques et extra‑hépatiques, en interface avec l’oxydation dépendante des CYP, l’équilibre redox et les voies de disposition médiées par des transporteurs. Des variations d’expression ou d’activité d’UGT1A9 peuvent modifier la prise en charge cellulaire des médicaments et des métabolites, influençant la susceptibilité à des réponses au stress induites par les métabolites. En recherche, UGT1A9 constitue un nœud clé pour étudier la capacité de glucuronidation, la chimie biologique et la variabilité interindividuelle de la biotransformation.

UGT1A9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UGT1A9 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGT1A9 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UGT1A9 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UGT1A9, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGT1A9. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UGT1A9 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGT1A9 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGT1A9 dans les cellules tumorales présentant une expression de UGT1A9 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.