UGT1A9 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-417693-ACT

UGT1A9 codifica uma UDP‑glicuronosiltransferase humana que catalisa a glicuronidação de diversos xenobióticos e pequenas moléculas endógenas, aumentando a sua solubilidade em meio aquoso e facilitando a eliminação. Como enzima de metabolismo de fase II, a UGT1A9 contribui para redes de desintoxicação hepáticas e extra-hepáticas que se articulam com a oxidação dependente de CYP, o equilíbrio redox e vias de disposição mediadas por transportadores. Variações na expressão ou na atividade de UGT1A9 podem alterar a forma como as células processam fármacos e metabolitos, influenciando a suscetibilidade a respostas de stress desencadeadas por metabolitos. Em contextos de investigação, a UGT1A9 funciona como um nó-chave para estudar a capacidade de glicuronidação, a biologia química e a variabilidade interindividual na biotransformação.

UGT1A9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de UGT1A9 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

UGT1A9 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus UGT1A9 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição UGT1A9, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de UGT1A9. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus UGT1A9 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de UGT1A9 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via UGT1A9 em células tumorais com expressão de UGT1A9 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.