Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGT1A5: sc-402838-ACT

UGT1A5 code une UDP‑glucuronosyltransférase qui catalyse des réactions de glucuronidation lors du métabolisme de phase II, augmentant la solubilité et favorisant l’élimination d’une grande diversité de composés endogènes et xénobiotiques. En tant que composante du locus UGT1A, UGT1A5 contribue aux réseaux cellulaires de détoxification, en interaction avec le métabolisme hépatique et extra‑hépatique, l’équilibre rédox et les réponses au stress chimique. Les variations d’activité de la famille UGT1A sont largement étudiées pour leur impact sur le devenir des médicaments, l’homéostasie métabolique et la susceptibilité à la toxicité liée aux expositions environnementales. Une capacité de glucuronidation dérégulée est également pertinente dans les modèles de dysfonctionnement hépatique et en biologie du cancer, où une conjugaison altérée peut influencer les métabolites de signalisation et la prise en charge des xénobiotiques.

UGT1A5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UGT1A5 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGT1A5 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UGT1A5 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UGT1A5, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGT1A5. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UGT1A5 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGT1A5 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGT1A5 dans les cellules tumorales présentant une expression de UGT1A5 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.