Plasmide CRISPR d'Activation (h) UGT1A3: sc-402839-ACT

UGT1A3 code une UDP‑glucuronosyltransférase hépatique et intestinale qui catalyse la glucuronidation de composés lipophiles, augmentant leur solubilité dans l’eau afin de favoriser leur élimination par voie biliaire et rénale. En tant qu’élément de la phase II du métabolisme des xénobiotiques, UGT1A3 contribue à la détoxification chimique et à l’homéostasie métabolique en conjuguant des molécules endogènes telles que les acides biliaires et des substrats dérivés des stéroïdes, ainsi qu’une grande diversité de médicaments. Son activité s’inscrit dans des réseaux plus larges de réponse aux xénobiotiques, régulés par des récepteurs nucléaires qui coordonnent le contrôle transcriptionnel des enzymes de métabolisation des médicaments et des transporteurs. Une expression altérée de UGT1A3 ou des variations fonctionnelles sont pertinentes pour expliquer les différences interindividuelles de métabolisme et de devenir des xénobiotiques, et alimentent les études mécanistiques en pharmacogénomique et en toxicologie.

UGT1A3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UGT1A3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UGT1A3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UGT1A3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UGT1A3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UGT1A3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UGT1A3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UGT1A3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UGT1A3 dans les cellules tumorales présentant une expression de UGT1A3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.