Particules Lentivirales d'Activation (h) UGT1A1: sc-401190-LAC

UGT1A1 code l’UDP‑glucuronosyltransférase 1A1, une enzyme microsomale de détoxification de phase II qui catalyse la glucuronidation de la bilirubine et de divers substrats endogènes et xénobiotiques dans le réticulum endoplasmique. En convertissant des composés lipophiles en glucuronides plus hydrosolubles, UGT1A1 favorise l’élimination hépatique et s’intègre à des voies plus larges du métabolisme des médicaments, notamment la biotransformation liée aux cytochromes P450 et l’efflux médié par des transporteurs. Les variations d’expression ou d’activité d’UGT1A1 constituent un déterminant majeur de l’homéostasie de la bilirubine et des différences interindividuelles dans le métabolisme des médicaments et des substances chimiques environnementales, avec une forte pertinence pour la pharmacogénomique et la recherche sur la fonction hépatique. La dérégulation de la capacité de glucuronidation est également étudiée dans le contexte du stress métabolique et des mécanismes des maladies hépatobiliaires.

Les particules d'activation lentivirales UGT1A1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de UGT1A1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales UGT1A1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription UGT1A1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de UGT1A1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif UGT1A1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.