Plasmide Double Nickase (h) UDG: sc-403189-NIC

Le gène humain **UNG** code l’uracile-ADN glycosylase (UDG), un initiateur clé de la réparation par excision de base, qui retire l’uracile de l’ADN résultant de la désamination de la cytosine ou d’une incorporation erronée de dUTP. En générant des sites abasiques ensuite pris en charge par des endonucléases AP, des polymérases et des ligases, UNG contribue au maintien de l’intégrité du génome lors de la réplication et de la réparation de l’ADN. L’activité d’UNG interfère également avec les processus de diversification des anticorps dans les cellules B en modulant le traitement des lésions à l’uracile introduites au cours de l’hypermutation somatique et de la recombinaison de commutation de classe. Un traitement dérégulé de l’uracile et une réparation par excision de base altérée ont été associés à une charge mutationnelle accrue et à des phénotypes d’instabilité génomique pertinents pour la biologie du cancer et les modèles de dommages à l’ADN liés à l’inflammation.

UDG Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UNG dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UNG. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UNG. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UNG.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.