Plasmide CRISPR d'Activation (h) UCP2: sc-400319-ACT

UCP2 (protéine découplante 2) est un transporteur de la membrane mitochondriale interne qui module la fuite de protons afin d’influencer l’efficacité de la phosphorylation oxydative, le potentiel de membrane mitochondrial et la production d’ATP cellulaire. En ajustant la génération d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) et l’état rédox mitochondrial, UCP2 agit sur les réponses au stress, la reprogrammation métabolique et les signalisations de survie liées à la disponibilité des nutriments. L’activité d’UCP2 s’entrecroise avec des voies régulant la sécrétion d’insuline, l’utilisation des acides gras, la signalisation de l’inflammasome et le contrôle qualité mitochondrial, ce qui la rend pertinente pour l’étude des dysfonctionnements métaboliques, de l’inflammation et de la bioénergétique des cellules tumorales. Une expression dérégulée d’UCP2 a été associée à des altérations de la gestion du stress oxydant et du métabolisme mitochondrial dans de multiples contextes pathologiques, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent en recherche mitochondriale et immunométabolique.

UCP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UCP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UCP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UCP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UCP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UCP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UCP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UCP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UCP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de UCP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.