Plasmide Double Nickase (m) Ubr4: sc-427303-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Ubr4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Ubr4 Double Nickase (m) et le plasmide Ubr4 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Ubr4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Ubr4 Antibody (21-Y): sc-100615
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Ubr4 | sc-427303-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Ubr4 | sc-427303-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Ubr4** code une ligase E3 de l’ubiquitine qui participe à la voie ubiquitine–protéasome de la **règle du N‑terminal (N-end rule)**, reliant la reconnaissance des substrats à la protéostasie et à un renouvellement protéique régulé. **UBR4** a été impliquée dans le trafic endocytique, l’homéostasie des protéines membranaires et, plus largement, dans le contrôle ubiquitine‑dépendant des réponses cellulaires au stress. Par ces fonctions, UBR4 influence la survie et la différenciation cellulaires, ainsi que des processus neuronaux et du développement où une dégradation des protéines finement contrôlée est nécessaire. Le dérèglement des réseaux d’ubiquitination et de protéostasie impliquant les ligases de la famille UBR est pertinent pour des études de neurobiologie, de phénotypes cardiométaboliques et de vulnérabilités de signalisation associées au cancer dans des systèmes modèles.
Ubr4 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Ubr4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Ubr4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Ubr4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Ubr4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.