Ubiquitin CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (m): sc-423574

개요

Ubb는 유비퀴틴(ubiquitin)을 암호화하며, 유비퀴틴은 표적 단백질에 공유 결합으로 부착되어 단백질의 안정성, 세포 내 위치, 신호전달을 조절하는 고도로 보존된 76개 아미노산 길이의 변형 단백질입니다. 유비퀴틴화(ubiquitination)는 프로테아좀 의존적 분해, 엔도사이토시스, DNA 손상 반응을 조율하고, 유비퀴틴 결합 어댑터를 통해 자가포식(autophagy)과도 연결되어 단백질 항상성(proteostasis)을 제어합니다. 마우스 세포에서 유비퀴틴 의존적 신호전달은 유비퀴틴 사슬의 토폴로지와 E3 리가아제의 특이성에 의해 세포주기 진행, 스트레스 반응, 면역 경로 조절에 광범위하게 기여합니다. 유비퀴틴 항상성과 프로테아좀 플럭스의 이상은 신경퇴행, 염증, 암 관련 스트레스 적응 연구에서 기전적 지표로 흔히 활용되므로, Ubb는 경로를 분석·규명하기 위한 핵심 노드로 여겨집니다.

Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m)는 mouse 세포주에서 Ubb 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 Ubb 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 Ubb의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Ubiquitin 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Ubiquitin 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 Ubb 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Ubiquitin 기능에 중요한 Ubb 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 Ubb 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m) 및 Ubiquitin CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는 gRNA는 Ubb 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Ubiquitin HDR 플라스미드 (m) 및 Ubiquitin HDR 플라스미드 (m2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 Ubb 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 Ubb 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.