Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Plasmide Double Nickase (h) UBC13: sc-417204-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) UBC13 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide UBC13 Double Nickase (h) et le plasmide UBC13 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant UBE2N. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: UBC13 Antibody (F-10): sc-376470
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) UBC13 | sc-417204-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) UBC13 | sc-417204-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
UBE2N code l’enzyme E2 de conjugaison de l’ubiquitine UBC13, qui forme un hétérodimère fonctionnel avec UBE2V1/UBE2V2 afin de catalyser l’assemblage de chaînes de polyubiquitine liées en K63. Ces signaux ubiquitine non protéolytiques coordonnent les réponses aux dommages de l’ADN, la signalisation de l’immunité innée et de l’inflammation, ainsi que la protéostasie, en influençant notamment l’activation de NF-κB en aval de récepteurs tels que TNFR et TLR/IL-1R via l’ubiquitination des adaptateurs de la voie. L’ubiquitination dépendante d’UBC13 contribue également au maintien du génome grâce à des signaux ubiquitine au niveau des sites de lésions de l’ADN. Une activité dérégulée de UBE2N/UBC13 a été associée à une altération de la signalisation immunitaire et à des phénotypes d’instabilité génomique, pertinents pour l’étude des troubles inflammatoires et de la biologie des cancers.
UBC13 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus UBE2N dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de UBE2N. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de UBE2N. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de UBE2N.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.