Plásmido Doble Nickase (h) UBC13: sc-417204-NIC

UBE2N codifica la enzima E2 conjugadora de ubiquitina UBC13, que forma un heterodímero funcional con UBE2V1/UBE2V2 para catalizar el ensamblaje de cadenas de poliubiquitina enlazadas por K63. Estas señales de ubiquitina no proteolíticas coordinan las respuestas al daño del ADN, la señalización innata inmunitaria e inflamatoria, y la proteostasis, influyendo de manera notable en la activación de NF-κB aguas abajo de receptores como TNFR y TLR/IL-1R mediante la ubiquitinación de adaptadores de la vía. La ubiquitinación dependiente de UBC13 también contribuye al mantenimiento del genoma a través de la señalización por ubiquitina en sitios de lesiones del ADN. La actividad desregulada de UBE2N/UBC13 se ha implicado en alteraciones de la señalización inmunitaria y en fenotipos de inestabilidad genómica relevantes para estudios de trastornos inflamatorios y biología del cáncer.

UBC13 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus UBE2N en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de UBE2N. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de UBE2N. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con UBE2N alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.