Plasmide CRISPR d'Activation (h) UBA2: sc-404495-ACT

UBA2 code la sous-unité 2 de l’enzyme d’activation de SUMO, qui s’hétérodimérise avec SAE1 pour former l’enzyme E1 initiant la SUMOylation en adénylant SUMO puis en le transférant à l’enzyme E2 de conjugaison UBC9. Cette voie régule la stabilité des protéines, leur localisation subcellulaire et leur activité dans des processus clés, notamment la signalisation des dommages à l’ADN, l’organisation de la chromatine, le contrôle transcriptionnel et la progression du cycle cellulaire. La SUMOylation dépendante d’UBA2 influence les réponses au stress et la protéostasie via sa coordination avec des réseaux de modifications de type ubiquitine. Une activité dérégulée de la voie SUMO, incluant une fonction ou une expression altérées d’UBA2, a été impliquée dans des programmes transcriptionnels oncogéniques et des défauts de maintien du génome pertinents pour la biologie des cancers ainsi que pour d’autres phénotypes liés à la prolifération ou au stress.

UBA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de UBA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

UBA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus UBA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription UBA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de UBA2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus UBA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de UBA2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie UBA2 dans les cellules tumorales présentant une expression de UBA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.