Plasmide CRISPR/Cas9 KO twist2 (m): sc-419989

Présentation

Twist2 code un facteur de transcription de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui régule les programmes de lignée mésenchymateuse, contrôlant les choix de destinée cellulaire, la prolifération et la différenciation au cours de l’embryogenèse et de l’homéostasie tissulaire. Chez la souris, Twist2 influence des réseaux transcriptionnels liés à des processus de type transition épithélio-mésenchymateuse (TEM), au remodelage de la matrice extracellulaire, ainsi qu’au dialogue avec des voies telles que TGF-β et Wnt, qui façonnent la morphogenèse et le comportement des cellules stromales. Une activité altérée de TWIST2 a été associée à des anomalies du développement et à des réponses inflammatoires et fibrosantes dérégulées, ce qui en fait un nœud pertinent pour étudier les circuits de régulation génique en biologie des tissus conjonctifs. Des modèles de perte de fonction permettent d’examiner comment Twist2 coordonne des programmes transcriptionnels de répression/activation dans les fibroblastes, les précurseurs myogéniques et les compartiments stromaux associés à l’immunité.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO twist2 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Twist2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Twist2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Twist2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine twist2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Twist2 pour l'étude de la signalisation de twist2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Twist2 essentiels à la fonction de twist2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Twist2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le twist2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le twist2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Twist2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le twist2 plasmide HDR (m) et le twist2 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Twist2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Twist2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.