Particules Lentivirales d'Activation (h) twist: sc-400108-LAC

TWIST1 code pour Twist, un facteur de transcription de type basic helix-loop-helix (bHLH) qui régule la spécification des lignages mésenchymateux, la morphogenèse et les programmes de transition épithélio-mésenchymateuse (TEM). Twist intègre des réseaux transcriptionnels du développement à des voies de signalisation telles que TGF-β, WNT/β-caténine et PI3K/AKT afin de moduler les décisions de destin cellulaire, la survie et l’expression de gènes associés à la motilité. Une expression dérégulée de TWIST1 est liée à des états de différenciation altérés, à une invasivité accrue et à des phénotypes de type cellules souches dans de multiples contextes cancéreux, et une altération germinale est associée à des troubles du développement craniofacial, notamment le syndrome de Saethre–Chotzen. Ces propriétés font de TWIST1 un nœud clé pour étudier le contrôle transcriptionnel de la plasticité, le changement de lignée et les réponses au microenvironnement dans les cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales twist (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de TWIST1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales twist (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription TWIST1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de twist. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif TWIST1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.