Twinkle CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-432601

概要

マウスTwnkは、ミトコンドリアDNA（mtDNA）ヘリカーゼであるTwinkleをコードしている。Twinkleは核にコードされる酵素で、複製時にmtDNAをほどき、ミトコンドリアゲノムのコピー数維持を支える。Twinkleはミトコンドリアのレプリソーム内でPOLGやmtSSBと協調して機能し、複製フォークの進行、Dループの動態、およびミトコンドリア生合成全体を調整する。この経路が破綻すると、酸化的リン酸化能が障害され、ミトコンドリアヌクレオイドの構造が変化し、細胞代謝を再編する代償的ストレス応答が誘発されることがある。TWNKの機能不全はmtDNA枯渇や複数のミトコンドリア疾患表現型と関連しており、Twnkは生物医学研究においてミトコンドリアゲノム不安定性をモデル化するための重要な座位である。

Twinkle CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるTwnk遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Twnk内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Twnkのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Twinkleタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Twinkleシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Twnk欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Twinkleの機能に不可欠なTwnkエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Twnkゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Twinkle CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびTwinkle CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Twnk遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Twinkle HDRプラスミド（m）および Twinkle HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはTwnkホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のTwnk標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。