Twinkle CRISPR/Cas9 케이오 플라스미드 (h): sc-404159

개요

TWNK는 미토콘드리아 DNA(mtDNA) 헬리케이스인 Twinkle을 암호화하며, mtDNA 복제와 뉴클레오이드(nucleoid) 유지에 필수적이고 미토콘드리아 복제체(replisome)와 함께 작동하여 산화적 인산화 능력을 뒷받침합니다. Twinkle은 복제 과정에서 이중가닥 mtDNA를 풀어줌으로써 mtDNA 복제수(copy number)와 유전체 무결성을 보존하는 데 기여하며, 그 결과 미토콘드리아 전사, 호흡사슬 형성, 세포 에너지 항상성에 영향을 미칩니다. TWNK의 이상은 mtDNA 고갈 또는 다중 결실을 포함한 미토콘드리아 유전체 불안정성과 연관되며, 신경근육 및 신경퇴행성 미토콘드리아 질환의 표현형과 관련이 있습니다. 따라서 TWNK 기능상실 연구는 미토콘드리아 스트레스 신호전달, 생체에너지 재편성, 복제 연관 mtDNA 손상 반응을 조사하는 데 중요합니다.

Twinkle CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h)는 human 세포주에서 TWNK 유전자의 표적 파괴를 위해 설계된 플라스미드 풀입니다. 각 플라스미드는 TWNK 유전자 내의 서로 다른 부위를 표적으로 하는 고유한 단일 가이드 RNA(sgRNA)와 Streptococcus pyogenes Cas9 뉴클레아제를 함께 발현합니다. 또한 이 플라스미드들은 GFP를 암호화하여, 형광 현미경이나 유세포 분석기를 통해 성공적으로 형질전환된 세포를 형광으로 식별하고 농축할 수 있게 합니다.

다중 가이드 설계는 Cas9에 의한 이중 가닥 절단 형성 후 TWNK의 개방 독서 틀(ORF)을 파괴하는 삽입 또는 결실(indel)이 발생할 가능성을 높입니다. CRISPR/Cas9 시스템에 의해 유발된 DNA 절단은 내인성 비동종 말단 결합(NHEJ) 경로를 통해 복구되며, 이는 종종 Twinkle 단백질 발현을 소멸시키는 프레임 시프트 돌연변이를 초래합니다.

이 CRISPR 녹아웃 시스템은 Twinkle 신호 전달 연구, 기능 유전체학 연구, 암 생물학 연구 및 인간 세포주에서의 치료 반응 평가를 위한 TWNK 결핍 세포 모델을 효율적으로 생성할 수 있게 합니다.

주요 특징

• Twinkle 기능에 중요한 TWNK 엑손을 표적하는 sgRNA
  전달을 단순화하기 위해 단일 플라스미드에서 SpCas9 및 sgRNA의 공동 발현
  형질전환된 세포 식별을 위한 GFP 리포터
  녹아웃 효율 향상을 위해 여러 TWNK 게놈 부위를 표적하는 플라스미드 풀
  형질전환을 통한 전달과 호환

설계 변형

CRISPRs +/- HDR

• Twinkle CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h) 및 Twinkle CRISPR/Cas9 KO 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는 gRNA는 TWNK 유전자좌 내의 서로 다른 부위를 표적화합니다. 표적화 설계 중 하나 또는 둘 다 이용 가능할 수 있습니다. 구입 가능 여부는 관련 제품을 참조하십시오.
  Twinkle HDR 플라스미드 (h) 및 Twinkle HDR 플라스미드 (h2)에 의해 암호화되는
  HDR 기증자 컨스트럭트는 푸로마이신 내성 카세트와 RFP 리포터를 포함하며, 이는 CRISPR/Cas9 KO 설계에 해당하는 정의된 TWNK 표적 부위에서의 상동성 유도 복구를 지원하기 위해 TWNK 상동성 암으로 둘러싸여 있습니다. HDR 기증자의 재고 여부는 달라질 수 있습니다. 재고 여부는 관련 제품을 참조하십시오.

연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.