Plasmide CRISPR/Cas9 KO Tuba (h): sc-406569

Présentation

DNMBP code pour Tuba, un facteur d’échange de nucléotides guanyliques (GEF) de la famille Rho, à domaines multiples, qui relie la signalisation membranaire au remodelage du cytosquelette d’actine et des microtubules. En activant de petites GTPases telles que CDC42 et en se coordonnant avec des complexes endocytiques et jonctionnels, Tuba contribue à réguler la polarité cellulaire, le trafic vésiculaire et le remodelage des jonctions d’adhérence et des jonctions serrées. Ces fonctions situent DNMBP au sein de voies qui contrôlent l’organisation épithéliale, la croissance des neurites et la morphogenèse dépendante de la migration. Des dérégulations de la signalisation du cytosquelette et des réseaux de polarité impliquant Tuba ont été mises en cause dans des contextes d’invasion cellulaire aberrante et de phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui soutient son intérêt pour des études mécanistiques de l’architecture cellulaire pertinente pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Tuba (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène DNMBP dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du DNMBP, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert DNMBP à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Tuba.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en DNMBP pour l'étude de la signalisation de Tuba, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de DNMBP essentiels à la fonction de Tuba
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de DNMBP pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Tuba plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Tuba plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus DNMBP. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Tuba plasmide HDR (h) et le Tuba (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie DNMBP pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles DNMBP définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.