Trypsin-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401128

Panoramica

PRSS1 codifica la tripsina-1, una proteasi serinica secreta sintetizzata come tripsinogeno e attivata nel tratto gastrointestinale per scindere substrati peptidici e avviare cascate proteolitiche. La sua attività contribuisce all’attivazione degli enzimi digestivi e può modulare la proteolisi extracellulare, con effetti a valle sulla funzione della barriera epiteliale e sulla segnalazione infiammatoria. Un’attivazione disregolata della tripsina-1 e varianti di PRSS1 sono associate alla biologia della pancreatite, inclusi l’attivazione prematura degli zimogeni, le risposte di stress delle cellule acinari e i meccanismi di danno tissutale. PRSS1 rappresenta quindi un utile punto di partenza per studiare vie guidate da proteasi e relazioni genotipo-fenotipo in modelli di ricerca pancreatica e gastrointestinale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Trypsin-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PRSS1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PRSS1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PRSS1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Trypsin-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PRSS1 per lo studio della segnalazione di Trypsin-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PRSS1 critici per la funzione di Trypsin-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PRSS1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Trypsin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Trypsin-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PRSS1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Trypsin-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Trypsin-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PRSS1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PRSS1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.