Plasmide CRISPR/Cas9 KO Trx (m): sc-423563
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Trx Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Trx, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Trx Antibody (D-4): sc-271281
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Trx (m) | sc-423563 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Le gène murin **Txn1** code la thioredoxine (Trx), une oxydoréductase conservée qui maintient l’homéostasie rédox cellulaire en catalysant la réduction des ponts disulfure dans des protéines cibles. La Trx fonctionne au sein du système thioredoxine, aux côtés de la thioredoxine réductase et du NADPH, pour réguler des voies de signalisation sensibles à l’état rédox, notamment les voies MAPK et NF-κB, et pour tamponner les espèces réactives de l’oxygène générées durant le métabolisme et l’inflammation. En contrôlant le repliement des protéines, en soutenant la synthèse d’ADN via la ribonucléotide réductase, et en modulant l’apoptose et l’autophagie, **Txn1** contribue largement à l’adaptation cellulaire au stress. Une activité de la thioredoxine dérégulée est fréquemment associée à des phénotypes de stress oxydatif pertinents pour la neurodégénérescence, les dysfonctions métaboliques et les pathologies inflammatoires, faisant de **Txn1** un nœud utile pour des études mécanistiques des processus pathologiques liés au rédox.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Trx (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Txn1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Txn1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Txn1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Trx.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Txn1 pour l'étude de la signalisation de Trx, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Txn1 essentiels à la fonction de Trx
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Txn1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Trx plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Trx plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Txn1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Trx plasmide HDR (m) et le Trx (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Txn1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Txn1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.