Plasmide CRISPR d'Activation (h) Trx: sc-400746-ACT

Le gène humain **TXN** code la thioredoxine (Trx), une oxydoréductase exprimée de manière ubiquitaire qui maintient l’homéostasie rédox cellulaire en catalysant des réactions d’échange dithiol–disulfure et en soutenant les systèmes de défense antioxydants. Trx interagit avec l’axe thioredoxine réductase/NADPH et module des nœuds de signalisation sensibles au rédox qui influencent la régulation transcriptionnelle, le repliement des protéines et l’apoptose, notamment via la régulation de la signalisation de stress médiée par ASK1. En contrôlant les espèces réactives de l’oxygène intracellulaires et l’état rédox, **TXN** contribue à des processus tels que la prolifération, la signalisation inflammatoire et les réponses cellulaires à l’hypoxie et aux dommages de l’ADN. Une activité **TXN/Trx** dérégulée a été associée à une altération de la gestion du stress oxydant et à des phénotypes de signalisation observés dans divers contextes, notamment en biologie du cancer, dans les dysfonctionnements métaboliques et dans les situations de neuroinflammation.

Trx Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de TXN sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Trx Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus TXN dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription TXN, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Trx. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus TXN natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Trx au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Trx dans les cellules tumorales présentant une expression de TXN silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.